脂质染色
脂质是一类广泛存在于生物体中的有机分子，它们在细胞的结构和功能中扮演着重要角色。脂滴和胆固醇是脂质的不同形式，它们在结构和功能上有所不同。脂滴是中性脂的主要贮存场所，包括脂酰甘油和酯化胆固醇。在病理情况下，如器官发生脂肪变性，细胞内可能出现脂滴增多，通过脂肪染色能将这些脂滴清晰的显现出来。胆固醇是真核细胞细胞膜的重要成分，能够维持膜结构完整性，调节膜流动性，参与信号转导，在动脉硬化、Ｃ型尼曼匹克病（Niemann-Pick disease type C,NPC）、阿尔茨海默病等疾病的发生发展过程中起着重要作用。
脂滴和胆固醇的染色是病理学和细胞生物学研究中的重要技术，用于观察和量化细胞内脂质的积累。目前，脂滴染色使用最广泛的染料包括油红O（Oil Red O）、尼罗红（Nile Red）、苏丹染料（Sudan Dyes）等。胆固醇染色使用最多的染料是菲律平（Filipin III），Filipin已被广泛应用30余年。它可用于标记生物膜结构上及非细胞结构内的自由胆固醇，也能配合应用胆固醇酯化酶，使胆固醇酯水解成自由胆固醇而间接显色。
接下来，小爱就给大家详细介绍脂滴和胆固醇的染色方法。
一、脂滴染色1、组织切片脂滴油红O（abs42024259）染色（1）实验原理油红O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置入染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质（如脂滴）中，使组织内的脂滴呈橘红色。（2）染色步骤[1]① 油红O染色液配制： a.母液准备：称取1g油红O，加入100 mL异内醇配置成储存液，棕色瓶4℃密封保存。b.工作液准备：使用前加双蒸水稀释至60%，滤纸过滤后使用。② 用冰冻切片机切取5μm厚的肝组织切片；③ 用95%乙醇固定，蒸馏水清洗1min，60%异丙醇浸泡30min；④ 再用60%油红O染色溶液处理10min和15min，蒸馏水冲洗1min；⑤ 苏木素复染，用自来水清洗1~3min，光镜下观察肝细胞脂质沉积情况。（3）肝组织油红O染色结果图：
（注：图片来源于文献1）
2、细胞脂滴尼罗红（abs9114）染色以下染色方法仅供参考（1）实验原理尼罗红是一种亲脂性荧光染色剂，它是一类环境敏感性荧光染料，能够在富含脂质的环境中产生强烈的荧光，而在水性介质中的荧光强度极小，这种特性使得它成为了一款极重要检测细胞内脂滴的荧光指示剂，可以通过荧光显微镜和流式细胞检测结果。（2）染色步骤① 尼罗红染色液配制：a.母液准备：取适量的尼罗红（Mw：318.37g/mol）用无水DMSO充分溶解制备1mM储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。b.工作液准备：用HHBS或生理缓冲液（pH 7.0）将母液按1:1000稀释为1×尼罗红工作液，漩涡混匀。【注意】：尼罗红的实际染色浓度请参考文献或实验室体系来调整。以上只做参考。② 用检测化合物处理细胞一段时间。③ 离心并调整细胞浓度为1-5×105cell/管。④ 用500µL尼罗红工作液重悬细胞。⑤ 室温或37ºC避光孵育5-10min。⑥ 吸掉染色工作液，用HHBS或适当缓冲液清洗细胞。⑦ 用500µL预热的HHBS或培养基重悬细胞，使细胞密度为1-5×105cell/管。⑧ 荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，Ex/Em = 552/636 nm。【注意】：①对于贴壁细胞，可用HHBS或适当缓冲液清洗细胞，然后直接加入尼罗红工作液孵育；②细胞也可预固定，然后用尼罗红工作液染色。
二、胆固醇染色细胞胆固醇菲律平（Filipin III ，abs42018484）染色（1）实验原理菲律平的主要成分是Filipin III，它可以特异性地与游离胆固醇相互作用，而不与酯化的胆固醇结合。这种特异性结合是由于菲律平分子结构中包含多个共轭双键，使其能够与胆固醇分子的疏水部分形成复合物。当Filipin III与游离胆固醇结合后，其激发光谱波峰约在360 nm处，发射光谱波峰约在480 nm处。通过检测这些特定波长附近的荧光信号，可以表征细胞内的胆固醇含量。（2）染色步骤[2]① 菲律平染色液配制：a.母液准备：1mg菲律平粉末中加入1 mL DMSO，完全溶解配置成1mg/mL储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。b.工作液准备：使用前，取适量母液加入到PBS中，稀释成一定浓度的工作液（如0.1 mg/mL）备用。② 将细胞接种于盖玻片中，培养12-18h；③ 用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次后，在室温下用4%多聚甲醛固定20min；④ 室温下用0.1 mg/mL菲律平III处理细胞30min；⑤ 细胞再用0.35μg/mL碘化丙啶（PI）染色5min；⑥ 最后，用共聚焦激光扫描显微镜在405 nm处检测菲律平和PI染色的荧光强度。（3）星形胶质细胞/神经元细胞菲律平染色结果图
（注：图片来源于文献2）
爱必信（上海）生物科技有限公司可为科研人员提供非常全面的细胞结构（如细胞膜、细胞质、细胞核、细胞骨架、线粒体、溶酶体、外泌体、内质网等）染色相关染料。关于脂质染色，小爱今天就介绍到这里。下期小爱将为大家介绍外泌体的标记技术，感兴趣的老师记得关注我们呦！
参考文献: [1] Ji X, Ma Q, Wang X, et al. Digeda-4 decoction and its disassembled prescriptions improve dyslipidemia and apoptosis by regulating AMPK/SIRT1 pathway on tyloxapol-induced nonalcoholic fatty liver disease in mice[J]. J Ethnopharmacol. 2023;317:116827. [2] Huang Y, Zhang W, Guo X, et al. Cellular cholesterol loss by DHCR24 knockdown leads to Aβ production by changing APP intracellular localization[J]. J Lipid Res. 2023;64(5):100367.
脂质染色产品推荐：
货号
产品名称
λEx/λEm (nm)
产品描述
abs42018484
菲律平
360/480
测定未酯化胆固醇水平。
abs42024259
油红O
628/684
细胞脂滴染色；组织切片脂质染色。
abs42027851
苏丹Ⅳ
255/355
对组织切片脂类、甘油三酯、脂蛋白染色。
abs9114
尼罗红
552/636
测定细胞内的脂肪滴。
abs9214
苏木素染液
—
组织学中用于细胞核的染色。
abs9358
PI染色液（红色）
535/617
细胞核染色，常与菲律平
荧光染料产品推荐：
货号
产品名称
λEx/λEm (nm)
产品描述
abs45153674
DiO 高氯酸盐（绿色）
484/501
活细胞示踪、细胞膜染色
abs47048165
DiD 对氯苯磺酸盐（红色）
644/663
活细胞示踪、细胞膜染色
abs80001
霍乱毒素B亚单位（CTB）
—
神经示踪剂
abs80003
霍乱毒素B亚单位-FITC
494/520
神经示踪剂
abs45153692
DiR 碘化物（深红色）
748/780
动物活体成像
abs42075819
D-荧光素钾盐
—
动物活体成像
abs47048270
罗丹明标记鬼笔环肽（橙红）
540/565
细胞骨架染色（F-action）
abs47048271
鬼笔环肽-Fluor 488 (绿色)
493/517
细胞骨架染色（F-action）
abs47048272
鬼笔环肽-Fluor 555（橙红）
556/574
细胞骨架染色（F-action）
abs47014944
钙黄绿素红（红色）
560/574
细胞质染色
abs9106
CFSE(绿色)
492/517
细胞质染色
abs42006041
DASPEI
550/573
线粒体染色
abs9103
JC-1
585/590
线粒体膜电位检测
abs47038870
溶酶体绿色荧光探针
504/511
溶酶体染色
abs47038871
溶酶体红色荧光探针
577/590
溶酶体染色
abs9819
PKH26红色荧光细胞连接试剂盒
551/567
外泌体染色
abs9820
PKH67绿色荧光细胞连接试剂盒
490/502
外泌体染色
abs47038874
内质网绿色荧光探针
489/520
内质网染色
abs47038875
内质网红色荧光探针
587/615
内质网染色
abs47047616
DAPI染色液 （蓝色）
364/454
细胞核染色
abs813337
Hoechst 33342（蓝色）
350/461
细胞核染色
abs9104
7-AAD（红色）
545/650
细胞核染色
abs9358
PI染色液（红色）
535/617
细胞核染色
abs45153639
Fluo 3-AM
506/526
钙离子（Ca2+）探针
abs42197174
DCFH-DA
502/523
活性氧（ROS）探针
abs42016243
DAF-2 DA
491/513
一氧化氮（NO）探针
abs47044989
WSP-1
465/515
硫化氢（H2S）探针